2011年10月6日 星期四

顯微鏡基礎知識相關問答


Q:什麼是數值孔徑NA?
A:數值孔徑是物鏡和聚光鏡的主要技術參數,是判斷兩者(尤其是對物鏡而言)性能高低的重要標誌。數值孔徑越高,分邊率越高,焦深則越小。

Q:是否可以在無限遠光學系統上使用有限遠筒長的物鏡?
A:您可能能夠將物鏡擰上物鏡轉盤,但由於無限遠光學系統光路上的結像透鏡的關係,使用有限遠系統的物鏡不能得到最佳的圖像。

Q:是否可以在有限遠筒長的顯微鏡上使用無限遠系統的物鏡?
A:不能。因為像有限遠光學系統不包含可使平行光路聚焦在目鏡光欄面的結透鏡。

Q:相差物鏡是否可以用於其他觀察方法?
 A:是的,可以。僅需移動相差聚光鏡到“0”位置同時使用柯勒照明。相差物鏡在其後焦平面上有相板,但是大部分光不受這個相板的影響。因此,對圖像質量僅有輕微的影響,對明場圖像依然有用。Olympus製造的相差物鏡還可應用於熒光觀察。

Q:相差物鏡上標記的Ph1、Ph2、Ph3是什麼意思?

A:相差物鏡要配合安裝在聚光鏡的環狀光闌來使用。光闌的直徑要與物鏡的NA值相匹配。Olympus UIS的物鏡,Ph1表示物鏡的NA值不超過0.50;Ph2表示NA值在0.55至1.0之間;Ph3表示NA值大於1.0(油鏡)。長工作距離的物鏡使用專用的相差環。
 

Q:是否可以為視頻顯微方法選擇高NA值的物鏡觀察微小標本的細節? 
A:是的,可以。當您通過目鏡觀察時眩光可能圖像的細節變暗,但必要的信息往往包含在其中,那麼視頻增強技術可以處理這些信息並且獲得極好的視頻圖像。

Q:是否應該購買我所能買得起的最好的物鏡?
A:通常是這樣的,但不總是。如果你所觀察的標本的厚度有幾個微米,平場消色差或平場半复消色差物鏡就很好了,因為比起平場复消色差物鏡有更好的焦深。如果用於彩色照相,平場半复消色差比平場消色差物鏡得到的圖像要好。平場复消色差物鏡在微小細節上可以得到極好的觀察和照相的效果,但往往要花費比平場半复消色差物鏡高幾倍的價格。

Q:如何避免在滴油時損傷40倍的干式物鏡?
A:如果您經常使用100倍的油鏡,您可能想用50倍的油鏡來替換掉40倍的干鏡。50倍的平場消色差油鏡(NA0.90)比標準的40倍平場消色差或消色差幹鏡(NA 0.65)得到更加明亮的圖像,更好的清晰度。

Q:如何減少在40倍幹鏡上沾上香柏油?
A:當您在轉換40倍幹鏡和100倍油鏡時,盡量避免40倍的干鏡浸到油上。實驗室經常將這兩款物鏡裝在相對的方向上。

Q:為什麼有時候40倍的物鏡成像效果比20倍差?
A:當標本的厚度大於標準厚度0.17MM,或在蓋玻片上有其他物質。為了改善成像效果,您可以用帶校正環乾式物鏡,或用40倍和50倍的油鏡來取代40倍的干式物鏡,因為油浸物鏡對蓋玻片厚度變化的敏感性較小。


Q:如何在熒光觀察中使用平場校色差物鏡?
A:平場校色差物鏡適用於藍和綠激發波長,平場校色差物鏡的玻璃張力可以激發到近紫外。因此,平場校色差物鏡,它的數值孔徑比平場半复或平場復校色差物鏡低,所以它需要一個調光器。

Q:“乾式”物鏡(物鏡前透鏡與蓋玻片之間以空氣為介質)的數值孔徑最大能達到多少?
A:乾式物鏡的數值孔徑可達到0.95,但觀察蓋玻片時需要校正環。


Q:為什麼“乾式”20倍、40倍和60倍物鏡有校正環? 
A:旋轉校正環可以使物鏡內的透鏡組的距離,這樣校正由於蓋玻片過厚所帶來的球差。在正置顯微鏡中,校正環的校正蓋玻片範圍是0.11mm到0.22mm。倒置顯微鏡中,校正範圍0到2mm。

Q:為什麼20倍的物鏡或更高倍率的物鏡有彈簧或裝配可伸縮的前端透鏡?
A:物鏡一般的工作距離比較短,如果使用不小心物鏡的前端將會碰到載玻片或樣品。在透鏡前安裝彈簧裝置可以防止在使用時碰到樣品。如果安裝不正確,向反方向進行保護而且連續摩擦。

:"PL" or "NH"在相差物鏡上表示什麼意思?
A:"PL"代表“正低”,是正相差,是指標本比周圍環境暗,即明中之暗,適用於折射率比較弱的被檢物體。"NH"代表“負高”,是負相差,是指標本比周圍環境亮,即暗中之亮。適用於折射率比較弱的被檢物體。

Q:為什麼需要UV物鏡?
A:UV物鏡的透鏡組採用了新鍍膜工藝設計,這樣可以穿透近紫外波長的光,而普通的物鏡是達不到的,這種物鏡用於紫外熒光激發工作。新奧林巴斯無限遠校正萬能平場復校色差物鏡和萬能平場半復校色差物鏡在近紫外觀察的性能上有了很大改善。

Q:物鏡上為什麼帶有"NIC" or "DIC."標記?
A:這些物鏡上的標記特別用在諾瑪斯基或微分乾涉顯微鏡。

Q:對於"LWD" or "ULWD"對物鏡表示什麼意思?
A:這些長工作距離和超長工作距離物鏡,他們的工作距離指物鏡前端聚焦到樣品的距離比其他物鏡的工作距離要長。當需要用倒置顯微鏡觀察培養皿或petri皿,厚冶金金屬樣品,檢查IC電路板和一些焊接接口時,長工作距離和超長工作距離物鏡有一定優勢。

Q:物鏡上標記的顏色代表什麼意思?
A:物鏡上的顏色代表著放大倍率,這樣很容易識別物鏡的放大倍率。紅色標記表示放大倍率為4倍或5倍,黃色代表10倍,綠色代表20倍,蘭色代表40倍,50倍或60倍。白色代表100倍。奧林巴斯識別相差物鏡用紅色標記靠近物鏡的前透鏡,識別無限遠相差物鏡用綠色表示。

Q:為什麼物鏡上有“平場”標記?
A:平場物鏡可以使整個成像效果更加平坦。對於視場數為22的目鏡,許多物鏡都能使成像效果達到平坦。對於新的平場復校色差和平場半復校色差物鏡都能和視場數為26.5目鏡匹配達到清晰的成像效果。

Q:什麼是無限遠光學系統物鏡?
A:對於無限遠光學系統物鏡,光線以平行光束射向無限遠。例如物鏡,可以提供許多優點,無限遠光學系統包含可使平行光路聚焦在目鏡視場光闌。

Q:物鏡上標記的“160“是什麼意思?
A:這個標記表示物鏡是有限遠光學系統的,160MM的光學筒長指從物鏡轉盤(物鏡安裝處)到觀察筒頂部(目鏡安裝處)的距離。如果您在物鏡轉盤以上的光路中通過添加附件來增加這個距離,除非這些附件中含有校正透鏡,否則將會產生球差。

Q:為什麼蓋玻片的標準厚度為0.17MM?
A:0.17MM是蓋玻片的厚度,在物鏡的製造上已經將其厚度的像差計算在內。當物鏡數值孔徑大於0.45時,假定這個厚度過厚(或完全沒有覆蓋差)這樣最後的成像的效果達不到最佳鏡像效果。

Q:為什麼暗場顯微鏡需要特殊物鏡?
A:事實表明,在入射光進行觀察時,暗場聚光鏡不讓光束從上到下的通過被檢物體。然而,為了獲得很高的放大倍率,就需要帶虹彩光闌的物鏡來配合暗場聚光鏡使用。對於反射光進行暗場觀察時,需要明場/暗場物鏡進行在暗場下工作。這些物鏡(標記BD/BF/DF)功能是利用被檢物體表面反射或衍射光而形成的明亮圖像。

Q:為什麼有些物鏡帶虹彩光闌?
A:在使用暗場顯微鏡時為了保持背景足夠黑暗,物鏡的數值孔徑不應比暗場聚光鏡要高。虹彩光闌可以降低物鏡的數值孔徑,允許高數值孔徑的物鏡應用於暗場顯微鏡。虹彩光闌可以使高於數值孔徑1.2的物鏡應用於暗場顯微鏡。對於普通明場觀察,虹彩光闌可以處於打開狀態。

Q:為什麼有些物鏡是油鏡和水鏡?
A:物鏡的分辨率很大程度上取決於物鏡的NA值,NA值又受透鏡與標本之間介質的折射率的影響。高折射率的介質可以聚集更多的光使圖像更亮、更清晰。當使用空氣作為透鏡和標本之間的介質時,一般低NA值的物鏡就可滿足要求。但是,高NA值的物鏡需要高折射率的介質,那麼油可以達到高折射率。當NA值超過1.0時,在聚光鏡的頂部透鏡載玻片的底部點油可以達到更好的效果。浸油物鏡通常會標記“oil”或“oel”。一些物鏡會應用於活體標本的觀察,就需要水作為介質。這些物鏡通常會標記“WI”。

Q:為什麼物鏡有校正帽?
A:校正帽:用於C系列的校色差和半復校色差物鏡,觀察玻璃或塑料培養皿時校正球差。物鏡通過調節校正帽聚焦在皮氏培養皿或厚的載玻片而不影響成像效果。 

Q:消色差,半复消色差和復消色差的區別?
A:消色差或平場消色差物鏡至少能校正軸上點的位置色差(紅、藍兩色)、球差(黃綠光)、正弦差以及消除近軸點慧差。但在綠光和白光下顯微照相時能獲得好的鏡像效果(但不是最佳效果)。半复消色差或平場半复消色差物鏡能校正紅、藍兩色光的球差和色差。在成像質量上,遠好於消色差物鏡。在彩色顯微照相時選用半复消色差物鏡,從成像質量和經濟上都是最佳選擇。复消色差、平場复消色差物鏡,不僅能校正紅、綠、藍三色光的色差,而且在同一焦點平面上造象,達到消除“剩餘色差”(又稱二級色譜)的效果,同時能校正紅、藍兩色光的球差。它擁有更大的數值孔徑,這樣分辨率高,象質好,有更高的有效放大率。復校色差物鏡性能很高,適用於高級研究鏡檢和顯微照相。它的景深要比其他物鏡小,所以它比其它種類物鏡要昂貴。

Q:什麼是工作距離?
A:工作距離又叫物聚,指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離(不包括蓋玻片厚度)。

Q:景深和焦深的區別?
A:根據透鏡成像原理,焦點只有一個,唯有調焦目標才能在感光片上結成清晰的象,在調焦目標前後會出現一個清晰區—景深,數值孔徑越大,景深越小。焦深為焦點深度的簡稱,在使用顯微鏡時,當焦點對準一物體點時,不僅位於該點平面上的各點都能看清楚,而且在此平面上下一定厚度內,也能看的清楚,這個清晰部分的厚度就是焦深,數值孔徑越大,焦深越小

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