2011年10月5日 星期三

電子顯微鏡的類型


1. 透射電子 顯微鏡 ( Transmission Electron Microscope, TEM  
透射電鏡是應用最廣泛的一種電子 顯微鏡 , 佔使用電鏡的 80% ,其分辨率 , 放大倍率及各項性能比其它類型電鏡高 , 透射電鏡是用電子束照射標本 , 用電磁透鏡收集穿透標本的電子 , 並放大成像 , 用以顯示物體內部超微結構的裝置 . 透射電鏡所產生的圖像是平面的 . 它的分辨率可達 0.2 nm. 放大倍數可達 40 —100 萬倍 . 它要求樣品極薄,因此樣品必須製備成 50 —— 70nm 的超薄切片。

2. 掃描電子 顯微鏡 ( Scanning Electron Microscope, SEM 
掃描電子 顯微鏡 是利用細電子束在樣品上逐點逐行進行掃描 , 收集樣品產生的某種信號 , 對樣品表面的形態進行觀察的裝置 . 由光鏡或 TEM 所產生的圖像是平面的 , 而掃描電鏡能觀察樣品表面凸凹不平的結構 , 得到立體的 . 富有真實感的圖像 . 如 : 細胞表面的微絨毛 . 纖毛 . 偽足等 . 還可以觀察冷凍斷裂的組織內部結構 . 掃描電子 顯微鏡 的分辨率可達 0.3 nm, 放大倍數可達 20 萬倍 . 掃描電鏡的特點和應用如下它主要是利用二次電子成像。
掃描電鏡之所以能夠在許多領域內得到廣泛的應用,主要是掃描電鏡有許多突出的優點:
( 1 )掃描電鏡能直接觀察較大體積樣品表面的三維立體結構,具有明顯的真實感,這彌補了透射電鏡的不足,因為透射電鏡分辨率雖高,但樣品必須是薄切片,因而只能觀察物體的二維平面結構。 正因為如此,所以掃描電鏡在工業上應用非常廣泛。
( 2 )放大範圍很寬,可以從 10 倍到 20 即使在高倍觀察時,也能獲得足夠清晰的圖像。萬倍之間連續變化。
( 3 因此,樣品處理比透射電鏡要簡單得多。)樣品製備非常方便,如果是金屬導電樣品,直接就可以觀察,如是非導電材料,只要鍍上一層導電金屬碳膜,就可以觀察。
( 4 因此,觀察和照相都很方便。)當透射電鏡的放大倍數增加時,透鏡的焦深和景深隨之減少,而掃描電鏡在放大倍數變化時焦距不變,景深也基本不變。
( 5 )便於對樣品進行綜合分析,如果同 EDX 、 Anger 電子譜及電子衍射等儀器結合,即構成分析電鏡,可在觀察形態結構的同時進行化學元素的成份分析。
( 6 )由於掃描電鏡的圖像不是透鏡形成的幾何光學圖像,而是按照信號順序依次記錄的,因此,不僅可以避免透鏡成像的缺陷,而且有利於圖像分析與處理,把圖像信號記錄在磁帶或磁盤上,便於以後需要時再現或用計算機進行圖像處理,進一步提高圖像質量。

3. 高分辨率的掃描透射電鏡( STEM 
高分辨率的掃描透射電鏡是 20 世紀 70 年代初期由美國芝加哥大學首先研製出來的一種新型電鏡。
其工作原理居於掃描電鏡和透射電鏡之間,既有掃描電鏡和透射電鏡的優點,又彌補了它們各自的缺陷,目前廣泛使用的 STEM 主要分兩類。
( 1 )超高真空的場發射式電鏡 利用場發射電子槍可以獲得很高的亮度,可獲得的分辨率為 0.2 —0.3nm, 但這種場發射電子槍必須處於超高真空,真空度達 已接近透射電鏡的分辨率。13.33 × 10-9 pa( 10-10mmHg 但造價也極高。以上),燈絲是單晶鎢針尖,這是一種最具發展前途的電鏡。
( 2 )附加在透射電鏡或掃描電鏡上的 STEM
這種 STEM 為附件型,一般附加在 SEM 或 TEM 如是透射電鏡附件型 上,其分辨率較低。, 分辨率可達1 — 1.5nm, 如是掃描電鏡附件型分辨率一般只有 4--6nm. 這種附件型 STEM 主要用於 X 射線能譜、波譜分析或電子損失譜分析,用以觀察元素的分佈圖。

4. 高壓電子 顯微鏡
高壓電子 顯微鏡 通常是指加速電壓為 200kv 以上的透射電子 顯微鏡首先是由法國建成的,。 。1MV 高壓電鏡的優點很多,其一,因為應用了超高壓,所以可以獲得高能電子束。高壓電鏡的基本原理與常規投射電鏡相似,但體積卻要大的多,一般相當於兩三層樓房那樣高,結構也很複雜。。100kv 電鏡中的樣品厚度一般不超過 100 nm ,而 1000kv 高壓電鏡中的樣品厚度可接近 10um.. 其三,高壓電鏡的樣品室一般為環境樣品室,因而有可能觀察活體生物樣品,這對生物醫學研究有著廣闊的前景 其二,因為高壓電鏡的景深很長,所以用高壓電鏡觀察時,厚樣品中不同平面的細節均可清楚地成像在同一平面上,有利於立體像的拍攝,便於獲得更豐富的三維結構信息。因此,對樣品製備非常有利,特別是觀察難以製成超薄切片的金屬樣品極為方便。但高壓電鏡價格很高,維護困難,一般只在國家級的研究中心應用。目前已取得了一些成果,如培養細胞、血細胞方面的研究。。

5. 低壓電子 顯微鏡
因而人們提出了使樣品輻射損傷降低而反差增強的低壓電鏡。高壓電鏡的電子束具有很強的穿透力,因而能使樣品減少輻射損傷並能提高分辨率,但高壓電鏡使樣品的反差明顯減弱,這對生物樣品大為不利。3kv 時獲 得 1nm 透射型低壓電鏡目前很少應用,主要是在 的分辨率。SEM 上配置低壓裝置,稱高分辨率低壓掃描電鏡。

6. 環境掃描電子 顯微鏡
因而,限制了電鏡在生物醫學中的應用。這種研究方法觀察到的生物樣品結構是死的、非實時的。在環境掃描電鏡出現以前,電鏡研究用的生物樣品均要經過脫水、樹脂包埋等處理,以使電鏡光源——電子束在高真空中穿透樣品而成像。1995 年國外推出了樣品室壓力在 666.67 —— 1333.33Pa(5 — 10mmHg) 常壓下的環境掃描電鏡,可在幾乎接近常壓下觀察生物樣品,可以觀察活體生物成長發育時的超微結構變化。

7. 新型的電子 顯微鏡
掃描隧道 顯微鏡 、原子力 顯微鏡 ,這兩種 顯微鏡 是開展納米科學研究的新型的納米級 顯微鏡 。

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